MIB-1染色法

MIB-1染色法について

標準化に向けてのJBTRCよりの提案

  1. フォルマリン固定・パラフィン包埋組織を薄切
    (3μmに薄切し,シランコーティングスライドガラスに貼付。37℃の恒温槽で一晩乾燥密着させる。)
  2. 脱パラフィン (キシロール 3回)
  3. 脱キシロール (100%アルコール 3回)
  4. 内因性ペルオキシダーゼ活性ブロック (0.3%H2O2-メタノール溶液 室温30分)
  5. 洗浄 (アルコール100%→70%→40%→水道水→蒸留水→PBS)
  6. 抗原性賦活化処理 (0.01Mクエン酸緩衝液pH6.0を賦活溶液とし,オートクレーブ121℃10分間)
  7. 正常動物血清処理 (10%ウサギ血清 室温30分)
    ↓PBS洗浄 2~3回
  8. MIB-1抗体反応 (ダコ・ジャパンM7240,抗体濃度1:100,4℃一晩)
    ↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回
  9. 二次抗体反応 (ビオチン標識抗マウスIgG+IgA+IgM抗体*,室温30分間)
    ↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回
  10. 酵素試薬 (ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン*室温30分間)
    ↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回
  11. 発色 (DAB-H2O2溶液 室温5分間)
    ↓PBS洗浄 振とうしながら3分間 3回
  12. 希オスミウム酸溶液** 室温5分間
    ↓水道水洗浄 1~2分間
  13. 核染 (マイヤーのヘマトキシリン 6分間)
    ↓色出し(流水1~2分間)
  14. 脱水・透徹・封入

*  ヒストファインSAB-PO(M)キット,ニチレイ,東京
** 希オスミウム酸溶液による処理は省略してもよい。
*** 本染色法は、佐藤貴子,松尾優紀の論文に基づいて作成した。

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